...如插在泡沫塑料板上),37℃水浴保温2-3小时,使酶切反应完全。 3、每管加入2μl0.1mol/LEDTA(pH8.0),混匀,以停止反应,置于冰箱中保存备用。 二、DNA分子量标准的制备 采用EcoRⅠ或HindⅢ酶解所得的λDNA片段来作为电泳时的分...
参考资料医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术...对许多酶来说,相应延长反应时间(不超过16小时)也可完全反应。 二、选择正确的酶 不言而喻,选择的酶在底物DNA上必须至少有一个相应的识别位点。识别碱基数目少的酶比碱基数目多的酶更频繁地切割底物。假设一...
参考资料医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术...用部分酶解法测定DNA物理图谱包括二个基本步骤: (1)完全降解:选择合适的限制性内切酶将待测DNA链(已经标记放射性同位素)完全降解,降解产物经凝胶电泳分离后进行自显影,获得的图谱即为组成该DNA链的酶切片段的数目和...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;分子生物学...切酶用量可按标准体系1μgDNA加1单位酶,消化1-2小时。但要完全酶解则必须增加酶的用量,一般增加2-3倍,甚至更多,反应时间也要适当延长。 二.凝胶电泳 琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的标准方法。...
参考资料医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术...幽门螺杆菌,在较为长期保存后,染色体DNA酶切图谱带型完全一致。 3讨论 弯曲菌菌种保存,对于深入开展对本菌的研究,有着非常重要的意义,文献上介绍的方法不多,幽门螺杆菌用全血或加20%小牛血清布氏汤或加入...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;中国幽门螺杆菌研究...意:在southern杂交中对,DNA的质量要求较高,否则酶切不完全导致失败。 二转膜 1用0.2MHCl脱嘌呤处理,偶尔轻轻振荡至溴酚蓝完全变成黄色,大约需要15~30分钟。然后用水漂洗凝胶2~3次,将水倒尽,加入碱变性液,偶尔轻...
参考资料医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术...并进行序列测定。结果DNA测序证实该片段序列与文献报道完全一致。结论成功构建出pcDNA3.1-Nogo-c真核表达载体。 CloningandsequencingofNogo-candconstructionofitseucaryoticexpressionvector ChenChangjie,ZhangYao DepartmentofMolecularBiologyandBiochem...
参考资料合作平台;在线期刊;中华医学研究杂志;2004年第4卷第12期;论著...现为4种不相同的限制性酶切图谱,也有部分HCMV毒株具有完全相同的EcoRⅠ图谱(见图1)。从一位HCMV阳性的母亲尿标本中分离一株HCMV,经酶切图谱分析与儿童中的HCMV有差异,说明与患儿的HCMV不是同一来源限制性酶切图谱。 图1...
参考资料合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学...理。用部分酶解法测定DNA物理图谱包括两个基本步骤:(1)完全降解:选择合适的限制性内切酶将待测DNA链(已经标记放射性同位素)完全降解,降解产物经凝胶电泳分离后进行自显影,获得的图谱即为组成该DNA链的酶切片段的数目和大...
词条...性克隆进行序列测定分析。结果克隆出的mSLC基因经测序完全正确。PCR、双酶切及测序结果均证实构建的真核表达载体中已插入402bp的SLC的基因片断。结论小鼠次级淋巴组织趋化因子基因成功克隆,真核表达载体pcDNA3.1-mSLC-GPI-Fc构...
参考资料合作平台;在线期刊;中华医学实践杂志;2004年第3卷第11期;论著