...用的两种快速序列测定技术是Sanger等(1977年)提出的双脱氧链终止法及Maxam和Gilbert(1977年)提出的化学降解法,其中双脱氧链终止法是目前应用最多,最好的技术。 一、Sanger双脱氧链终止法原理 通常DNA的复制需要:DNA...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;动脉粥样硬化...接读出DNA上的核苷酸顺序。以下分别介绍。 1.Sanger双脱氧链终止法 DNA的合成总是从5′端向3′端进行的。DNA的合成需要模板以及相应的引导核酸链。DNA的合成过程中,在合成的DNA链的3′末端,依据碱基配对的原则,通过...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;生物化学与分子生物学...[9]等,但仍不失为一种有广泛应用前景的方法。 2.3双脱氧指纹图法(dideoxyfingerprinting,ddF)在对PCR产和的进行ropB基因突变检测方法的研究中,Felmee应用了ddF法[9],这种方法结合运用了双脱氧末端终止法及SSCP法的原理,它将rop...
参考资料合作平台;医学论文;内科学论文;呼吸病学...[9]等,但仍不失为一种有广泛应用前景的方法。2.3双脱氧指纹图法(dideoxyfingerprinting,ddF)在对PCR产和的进行ropB基因突变检测方法的研究中,Felmee应用了ddF法[9],这种方法结合运用了双脱氧末端终止法及SSCP法的原理,它将r...
参考资料医源资料库;在线期刊;中华医药杂志;2006年第6卷第10期...础。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和Gilbert(1977)发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大,但都是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生A...
参考资料医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术...PCR)PCR诞生于1985年,由美国Muliis等发明。PCR是一种根据脱氧核糖核酸(DNA)复制原理而设计的体外DNA或核糖核酸(RNA)扩增方法,由高温变性、低湿退火及适温延伸等反应组成一个周期,经过n个周期后,理论上可以获得2n双链DN...
参考资料医源资料库;在线期刊;中华现代临床医学杂志;2005年第3卷第19期...目前最常用的方法有Maxam-Gilbert的化学降解少和Sanger的双脱氧法等,近年来已有DNA序列自动测定仪问世。化学降解法是在DNA的片段的5`端标记核素,然后用专一性化学试剂将DNA特异地降解,在电泳和自显影后,可得到从标记端延伸...
参考资料医药经济;生物技术;实验技术;生化与分子技术...序在生命科学研究中一直发挥着重要作用。以Sanger法(双脱氧核苷酸末端终止法)为代表的第一代测序技术帮助人们完成了从噬菌体基因组到人类基因组图谱等大量测序工作,但由于其存在成本高、速度慢、通量低等不足,并不...
参考资料行业资讯;临床快报;遗传与基因组...泳证实。 1.4 阳性噬菌体克隆DNA序列分析 用Sanger双脱氧末端终止法对所提单链进行测序,测序方法参照Promega公司T7DNA聚合酶测序试剂盒说明书。电压2200V,预电泳30~40min,正式电泳3~4h。 1.5 含有保守序列的阳性克隆...
参考资料合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学...模板,对克隆的5′端进行大规模测序筛选;根据Sanger双脱氧链终止法原理、用BigDyeTerminator测序反应试剂盒在PCR9600扩增仪(Perkin-Elmer)上进行测序反应,反应产物经纯化后溶于甲酰胺-EDTA/蓝色右旋糖苷;在ABI377全自动测序仪上行5%...
参考资料合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学