...到合适的细胞中复制和表现功能。对理想的基因工程载体一般至少有以下几点要求： ①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。 ②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。 ③容易插入外来...
参考资料医源资料库；医源图书馆；教材类；生物化学与分子生物学...通常数百）不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链（一般为10bp）为引物，对所研究的基因组DNA进行PCR扩增，然后用凝胶电泳分开扩增片段，EB等染色剂染色后检测扩增产物DNA片段的多态性。与RAPD技术相类似的还有AP-PCR（Arbit...
参考资料医源资料库；医源习题集；分子生物学...23-3。 当需要用pBR322来克隆BamHI酶切的一个DNA片段时，一般的做法是如图23-4所示。图23-4 pBR322克隆DNA片段的程序 从图23-4可见，外源DNA片段同pBR322都经BamHⅠ酶切，所以有相同的单链“粘性末端”，通过DNA连接酶可以构成...
参考资料医源资料库；医源图书馆；教材类；实用免疫细胞与核酸...隆，这是基因治疗的前提，在当代分子生物技术条件下，一般来说，只要有基因探针和准确的基因定位，任何基因都可被克隆。除此，现在既可人工合成DNA探针，还可用DNA合成仪在体外人工合成基因，这些都是在基因治疗前，分...
参考资料医源资料库；医源图书馆；教材类；医学遗传学基础...。本研究也使采用置换型打靶载体。在打靶载体构建中，一般采用一长一短2条同源臂。短臂长0.5~2kb,利于用PCR方法对ES克隆进行筛选，长臂一般较长，难以用PCR鉴定克隆,同源臂总长度约5~10k。在载体构建中，根据已经公布的小鼠...
参考资料医源资料库；在线期刊；中华现代内科学杂志；2007年第4卷第1期...结构测定和表达要研究病毒基因组的结构与功能的关系，一般须先建立病毒基因组的无性繁殖系，这样才能获得足够量的病毒DNA。后者可采用细菌质粒、粘性质粒或λ噬菌体作为载体，转化大肠杆菌来完成。大的DNA病毒基因组可...
参考资料医药经济；生物技术；实验技术；生物工程下游技术...后，可得到从标记端延伸的片段供测读序列和进行比较。一般能读出200-250个核苷酸序列。双脱氧法是采用核苷酸链终止剂，如：2`，3`-双脱氧核苷三磷酸ddNTP(如ddTTP、ddTTP、ddGTP和ddCTP中的一种)掺入到DNA链中以终止链的延长，与掺...
参考资料医药经济；生物技术；实验技术；生化与分子技术...末端。内切酶品种多，使用时应注意温度、缓冲液用量（一般1μgDNA/2-5单位酶）等反应条件。酶识别序列切口AluⅠ…AGCT……AGCT…四核苷酸…TCGA……TCGA…平端切口EcoR1…GAATTC……GAATTC…六核苷酸…CTTAAG……CTTAAG…粘端切口 连...
参考资料药品天地；专业药学；实验技术；基本实验技术；实验技术...末端。内切酶品种多，使用时应注意温度、缓冲液用量（一般1μgDNA/2-5单位酶）等反应条件。酶识别序列切口AluⅠ…AGCT……AGCT…四核苷酸…TCGA……TCGA…平端切口EcoR1…GAATTC……GAATTC…六核苷酸…CTTAAG……CTTAAG…粘端切口 连...
参考资料医源资料库；医源图书馆；教材类；临床生物化学...在简并性。否则可能由于产量低而看不见扩增产物。 一般PCR反应中的引物终浓度为0.2-1.0μmol/L。引物过多会产生错误引导或产生引物二聚体,过低则降低产量。利用紫外分光光度计,可精确计算引物浓度,在1cm光程比色杯中,260nm...
参考资料医药经济；生物技术；实验技术；生化与分子技术