...预先温浴好的CTAB提取缓冲液,65℃保温30~60min;加等体积的氯仿和异戊醇(V氯仿∶V异戊醇=24∶1),4000g离心10min,酚、仿抽提重复多次,至有机相与水相无白色沉淀;加入预冷的无水乙醇(水体积的2.5倍),0.1倍NaAc,-20℃静置2h;挑出漂浮的白色...
参考资料药品天地;专业药学;中药大全;中药指纹图谱...制备 细菌质粒DNA用常规碱裂解法分离、RNaseⅠ消化、酚/氯仿抽提纯化[3];细菌基因组DNA用菌体冻融法制备:取少量细菌于1.5ml塑料离心管中,用蒸馏水重悬,加入少量溶菌酶于37℃水浴5min,放入液氮迅速冰冻5min,取出后立...
参考资料合作平台;医学论文;内科学论文;感染与传染病学...清50μL,加入含蛋白酶K的裂解液50μL,50℃温育12h,酚氯仿异戊醇抽提法提取B19DNA,-20℃保存备用。骨髓标本DNA提取:取骨髓涂片2~3张,用新手术刀片刮取血膜置Eppendorf管中,加入300μL裂解液,55℃消化1~2h,加入300μL...
参考资料医源资料库;在线期刊;齐鲁医学杂志;2007年第22卷第6期...检测①DNA的抽提:空腹抽取静脉血5ml,用低渗溶血,酚/氯仿法抽提基因组DNA,加适量TE缓冲液溶解后作为PCR模板。②聚合酶链反应(PCR)方法操作如下:引物设计[2]:P1:5′-ACAGAATTCCGCCCCGGCCTGGTACAC-3′:5′-TAAGCTTGGCACGGCTGTCCAAGGA-3...
参考资料医源资料库;在线期刊;中国煤炭工业医学杂志;2006年第9卷第11期...1.4 PCR产物的纯化与克隆 使用低熔点琼脂糖凝胶/酚/氯仿抽提法回收PCR产物,用PGEM-T载体试剂盒(购于Promega)对PCR产物进行克隆。用APQi和PSTI双酶切切下插入片段及用原PCR引物对重组质粒进行扩增来鉴定、筛选重组质粒。 1...
参考资料合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学...病人。1.2方法1.2.1细菌DNA的制备临床分离株DNA用常规酚/氯仿抽提法提取标本中DNA。1.2.2PCR扩增采用25μl反应体系,4XdNTPs终浓度为0.2mmol/L,Bio-标记引物终浓度为0.2μmol/L。扩增程序为:94℃变性1min,58℃退火1min,72℃延伸1min...
参考资料医源资料库;在线期刊;中国民康医学;2008年第20卷第24期...为气道反应性阳性(AHR)。 1.2基因多态性检测常规酚—氯仿法抽提DNA。参照文献[1]设计引物,由中科院细胞所合成。反应条件为95℃-5min→35个循环(95℃-1min-58℃-1min→72℃-2min)→72℃-1min,由GerieAmpPCRSystem2400(美国PERKINELMER公司)进行...
参考资料合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学...的1MTrispH7.0中和碱性裂解液。用Tris平衡酚提抽一次,酚—氯仿抽提一次,然后用无水乙醇或异丙醇沉淀DNA,提取的DNA溶于30μl蒸馏水或TE缓冲液中。 ②临床棉拭子标本的提取 将贴有分泌物的棉拭子在2ml的无菌生理盐水中...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;基因诊断与性传播疾病...S和蛋白酶K50μg/ml)中,55℃水浴1h后用等体积饱和酚,酚/氯仿和氯仿抽提,乙醇沉淀后溶于蒸馏水中。 2.反应系统:10×扩增缓冲液10μl,MgCl21.5mmol/L,4种dNTP200μmol/L,2种引物各100pmol,模板DNA10ng,加ddH2O至100μl。混匀后加入Taq...
参考资料合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学...分泌物经PBS稀解,离心后沉淀物经蛋白求恩酶K水解,酚/氯仿抽提等处理后与沙眼衣原体探针,如外膜蛋白基因的高度保守序列,或TE-55DNA探针等进行斑点杂交,可检出沙眼衣原体的15个血清型,而与其它细菌,病毒、立克次体等...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;临床基础检验学