...所有菌种,且扩增产物条带清晰,效果满意。用经典的酚氯仿抽提法扩增细菌,效果同Chelex100改良法,但步骤繁琐[3]。 2.临床标本的裂解:42例新生儿败血症血培养15例阳性,血标本经改良Chelex100裂解,PCR扩增后27例阳性,...
参考资料合作平台;医学论文;临床医学与专科论文;检验医学...酚(华美生物工程公司);琼脂糖(华美生物工程公司);氯仿(华美生物工程公司);无水乙醇(华美生物工程公司);蛋白酶K(华美生物工程公司);PCRMAKˉER(PGEM-3zf(+)/HaeIII)(华美生物工程公司);PCRsysˉtem(华美生物工程公...
参考资料合作平台;在线期刊;中华实用医药杂志;2004年第4卷第2期;其他...匀,6000r/min,离心5min。 5.上清移至另一Ep管,加0.5ml氯仿:异戊醇抽提,上下颠倒几次混匀,6000r/min,离心5min。 6.上清移至另一Ep管,加50μl的3mol/L乙酸钠和2ml预冷无水乙醇,上下颠倒几次混匀,可见絮状白色沉淀物。...
参考资料医药经济;生物技术;实验技术;细胞学技术...同的碱裂解法获含质粒DNA的上清,然后分别以传统的酚-氯仿抽提法(A)、异丙醇沉淀法(B)、QIAprepSpinMiniprep试剂盒(C)和QIAGENplasmidMidi试剂盒(D)提纯质粒DNA,经紫外分光光度计测A260和A280值并进行琼脂糖凝胶电泳和双酶切...
参考资料医源资料库;在线期刊;中华医药杂志;2007年第7卷第3期...床表现与不同HHV-8K15等位基因型的相关性。研究者采用酚-氯仿-异戊醇法对收集的27例Kaposi肉瘤石蜡包埋组织标本进行病毒DNA抽提,并使用巢式PCR扩增K15基因片段,然后测序并确定其等位基因型。结果发现27例Kaposi肉瘤中有22例HHV-8...
参考资料行业资讯;临床快报;皮肤病与性病...贯穿于分离纯化的整个过程中,如在制备核酸过程中,用氯仿反复提取蛋白液,用苯酚反复抽提分离DNA和RNA。影响提取的因素主要来自被提取物在提取的溶剂中的溶解度大小以及它由固相扩散到液相的难易。一个物质在某一溶剂...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;实用免疫细胞与核酸...白酶K(1mg/ml)的提取缓冲液加温孵育,然后进行苯酚和氯仿抽提。所得DNA虽不完整,但可被限制性内切酶切割,因而适于点杂交,印迹杂交等多种分子生物学实验。Dubeau等(1986)在上述方法上作了改进。首先通过组织切片用二...
参考资料医源资料库;医源图书馆;教材类;实用免疫细胞与核酸...度50μg/ml,37℃2小时作用后,以等体积的酚抽提1次,酚一氯仿抽提1次,加1/10体积5ml/LNaCL溶液,2.5倍体积无水乙醇,-70℃15分钟沉淀,15000r/mim4℃离心15分钟,以冷无水乙醇洗涤沉淀DNA后,室温自然干燥,加适量无菌水溶解,-70℃贮...
参考资料合作平台;医学论文;基础医学论文;微生物学...方法及产物的纯度。 DNA经典提取法[5],系采用酚、氯仿、异戊醇抽提,整个过程需数十小时以上。克隆序列测定,需将等位基因的PCR产物经低熔点琼脂糖回收纯化,然后经连接、转化、培养和提纯等步骤。我们根据GerbitzKD...
参考资料合作平台;在线期刊;中华实用医药杂志;2004年第4卷第20期;检验与临床...。临床样本100份,来源于可疑强直性脊柱炎患者。快速酚氯仿法提取模板DNA。结果:100例临床样本PCR-SSP行B27基因分型均获成功。总耗时4h。其中B27阴性58例,阳性42例,5例临床诊断为强直性脊柱炎,占11.9%。30份样本同时行血清学...
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