...50℃反应30min，75℃反应10min，置冰上结束反应。而后用酚氯仿抽提回收，用70%预冷乙醇洗净后，加TE溶解。再将pGEM-TEasy-OPN（201bp）酶切产物与pcDNA3.1（+）-EcoRI酶切产物用T4DNAligase连接，构建pcDNA3.1（+）-OPN（反应201bp）真核表达质...
参考资料资料库；在线期刊；中华现代外科学杂志；2004年第1卷第1期...NA的提取每例对象抽取静脉血5ml，用1mlACD抗凝，用饱和酚-氯仿法提取DNA。1.2.3基因片段扩增采用聚合酶链式反应（PCR）扩增ACE基因片段，引物设计均参考以往文献。PCR上游引物：5-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3；下游引物：5-GATGTGGCCATCACATTCG...
参考资料医源资料库；在线期刊；中国民康医学；2008年第20卷第24期...A的制备抽取静脉血2ml，EDTA抗凝，采用低渗溶血，常规酚-氯仿法提取白细胞基因组DNA。1.2.3引物的设计及合成MTHFR基因片段扩增引物为：上游5－AGGACGGTGCGGTGAGAGTG-3，下游5-TGAAGGAGAAGGTGTCTGCGG-3，由上海生工生物工程技术服务有限公司...
参考资料医源资料库；在线期刊；中华现代内科学杂志；2009年第6卷第1期...。 1.3方法 1.3.1DNA提取 取抗凝全血5ml，采用酚氯仿法提取基因组DNA。 1.3.2VDRTruⅠ基因型测定〔4〕 引物：A：5′-GGCAACCTGAAGGGAGACGTA-3；B：5-CTCTTTGGACCTCATCACCGAC-3。反应体系：模板DNA1.5μl，dNTP2μl（1mmol/L），10&tim...
参考资料医源资料库；在线期刊；中国矫形外科杂志；2007年第15卷第5期...育4h以激活单个核细胞。 1.2.2 总RNA的获得：采用酚-氯仿抽提法提取。 1.2.3 cDNA的获得：通过逆转录反应将总RNA变为cDNA。 1.2.4 PCR：将已获得的cDNA作为模板，加入不同的引物(表1)进行PCR扩增，条件为： IL-2：95℃...
参考资料合作平台；医学论文；临床医学与专科论文；检验医学...取静脉血3～5ml,EDTANa2抗凝，低渗溶血法分离白细胞,酚、氯仿法提取基因组DNA,并用乙醇沉淀,溶解于保存液(TAE)中(浓度为0.1mg/L),置-4℃冰箱保存。 1.2.2CYP1A1SNPrs4646903检测引物设计 引物［22］由北京赛百盛技术有限公司合成。...
参考资料医源资料库；在线期刊；中国热带医学杂志；2008年第8卷第1期...平是否异常。 1.2.3MC4R基因V103I多态性检测采用常规酚氯仿法从血凝块中提取DNA。参考文献［7］，用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）方法，对MC4R基因V103I多态性进行检测。PCR引物由北京奥科生物技术公司合...
参考资料医源资料库；在线期刊；中国学校卫生；2007年第27卷第1期...液浸泡的棉花去除硫化氢的干扰,然后与溶于三乙醇胺－氯仿中的二乙氨基二硫代甲酸银作用生成红色的络合物,比色定量。33.1.3试剂33.1.3.1硫酸溶液(1+1)。33.1.3.2碘化钾溶液(150g/L):称取15g碘化钾(KI),溶于纯水中,并稀释至100mL,贮于棕...
参考资料药品天地；专业药学；实验技术；色谱技术；色谱论文...液浸泡的棉花去除硫化氢的干扰,然后与溶于三乙醇胺－氯仿中的二乙氨基二硫代甲酸银作用生成红色的络合物,比色定量。33.1.3试剂33.1.3.1硫酸溶液(1+1)。33.1.3.2碘化钾溶液(150g/L):称取15g碘化钾(KI),溶于纯水中,并稀释至100mL,贮于棕...
参考资料药品天地；专业药学；实验技术；色谱技术；色谱分析实例...，用肝素抗凝。经裂解液裂解细胞后，采用硫氰酸胍-酚-氯仿一步法［5］提取细胞总RNA，-80℃保存。RNA质量检测：样品OD260/OD280比值在1.8～2.0之间,可行逆转录反应。 1.2.2逆转录实验反应程序：在PE-2400型PCR仪中进行，42℃2min后...
参考资料资料库；在线期刊；中华现代内科学杂志；2005年第2卷第8期